ຫຼັກການຂອງການທົດລອງ
Electrophoresis hemoglobin ມີຈຸດປະສົງເພື່ອກວດຫາແລະຢືນຢັນ hemoglobins ຕ່າງໆປົກກະຕິແລະຜິດປົກກະຕິ.
ເນື່ອງຈາກຄ່າບໍລິການທີ່ແຕກຕ່າງກັນແລະຈຸດ isoelectric ຂອງປະເພດ hemoglobin ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ໃນການແກ້ໄຂ pH buffer ທີ່ແນ່ນອນ, ເມື່ອຈຸດ isoelectric ຂອງ hemoglobin ຕ່ໍາກວ່າ pH ຂອງການແກ້ໄຂ buffer, hemoglobin ຮັບຜິດຊອບທາງລົບແລະເຄື່ອນຍ້າຍໄປສູ່ anode ໃນລະຫວ່າງການ electrophoresis. ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, hemoglobin ທີ່ມີຄ່າບວກຍ້າຍໄປສູ່ cathode.
ພາຍໃຕ້ແຮງດັນທີ່ແນ່ນອນແລະຫຼັງຈາກເວລາ electrophoresis ສະເພາະ, hemoglobins ທີ່ມີຄ່າບໍລິການແລະນ້ໍາຫນັກໂມເລກຸນທີ່ແຕກຕ່າງກັນສະແດງທິດທາງແລະຄວາມໄວທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ນີ້ອະນຸຍາດໃຫ້ສໍາລັບການແຍກເຂດທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ແລະການວິເຄາະການສະແກນ colorimetric ຫຼື electrophoretic ຕໍ່ມາສາມາດປະຕິບັດຢູ່ໃນເຂດເຫຼົ່ານີ້ເພື່ອປະລິມານ hemoglobins ຕ່າງໆ. ວິທີການທີ່ໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດແມ່ນ pH 8.6 cellulose acetate membrane electrophoresis.
ພາຍໃນ cytoplasm, ກຸ່ມ ethylene glycol (CHOH-CHOH) ທີ່ມີຢູ່ໃນ glycogen ຫຼືສານ polysaccharide (ເຊັ່ນ: mucopolysaccharides, mucoproteins, glycoproteins, glycolipids, ແລະອື່ນໆ) ຖືກ oxidized ໂດຍອາຊິດແຕ່ລະໄລຍະແລະປ່ຽນເປັນກຸ່ມ aldehyde (CHO-CHO). ກຸ່ມ aldehyde ເຫຼົ່ານີ້ສົມທົບກັບທາດປະສົມ Schiff ສີແດງທີ່ບໍ່ມີສີ, ປະກອບເປັນສີຍ້ອມສີມ່ວງສີແດງທີ່ຝາກໄວ້ບ່ອນທີ່ໂພລີຊຽມມີຢູ່ໃນຫ້ອງ. ປະຕິກິລິຍານີ້ແມ່ນເອີ້ນວ່າການ staining ອາຊິດ-Schiff (PAS), ແຕ່ກ່ອນເອີ້ນວ່າການ staining glycogen.
ວິທີການທົດລອງ
ວັດສະດຸ:Cellulose acetateເມັມbrane, ອຸປະກອນ electrophoresis(DYCP-38C ແລະການສະຫນອງພະລັງງານ DYY-6C), ເຄື່ອງມືການໂຫຼດຕົວຢ່າງທີ່ດີເລີດ(pipette), spectrophotometer, colorimetric cuvettes, buffers.
ບັຟເຟີ:
(1) pH 8.6 TEB Buffer: ນໍ້າໜັກ 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g ອາຊິດ boric, ແລະຕື່ມນ້ໍາກັ່ນໃສ່ 1000 ml.
(2) Borate Buffer: ນໍ້າໜັກ 6.87 g borax ແລະ 5.56 g boric acid, ແລະຕື່ມນ້ໍາກັ່ນໃສ່ 1000 ml.
ຂັ້ນຕອນ:
Pການແກ້ໄຂຂອງ hemoglobin Solution
ເອົາເລືອດ 3 ມລທີ່ມີ heparin ຫຼື sodium citrate ເປັນຢາຕ້ານການ coagulant. Centrifuge ຢູ່ທີ່ 2000 rpm ສໍາລັບ 10 ນາທີແລະຖິ້ມ plasma. ລ້າງເມັດເລືອດແດງສາມເທື່ອດ້ວຍນໍ້າເຄັມທາງກາຍະພາບ (750 rpm, 5 ນາທີ centrifugation ແຕ່ລະຄັ້ງ). Centrifuge ຢູ່ 2200 rpm ສໍາລັບ 10 ນາທີແລະຖິ້ມ supernatant ໄດ້. ຕື່ມປະລິມານທີ່ເທົ່າທຽມກັນຂອງນ້ໍາກັ່ນ, ຫຼັງຈາກນັ້ນຕື່ມ 0.5 ເທົ່າຂອງປະລິມານຄາບອນ tetrachloride. ສັ່ນຢ່າງແຮງເປັນເວລາ 5 ນາທີ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ centrifuge ທີ່ 2200 rpm ເປັນເວລາ 10 ນາທີເພື່ອເກັບກໍາການແກ້ໄຂ Hb ເທິງສໍາລັບການນໍາໃຊ້ຕໍ່ມາ.
ແຊ່ນ້ໍາ Membrane
ຕັດເຍື່ອ cellulose acetate ອອກເປັນແຖບຂະຫນາດ 3 cm × 8 cm. ແຊ່ພວກມັນໃນ pH 8.6 TEB buffer ຈົນກ່ວາອີ່ມຕົວເຕັມທີ່, ຫຼັງຈາກນັ້ນເອົາອອກແລະເຊັດໃຫ້ແຫ້ງດ້ວຍເຈ້ຍກອງ.
ຈຸດໆ
ໃຊ້ທໍ່ເພື່ອຈຸດ 10 μlຂອງການແກ້ໄຂ hemoglobin ໃນແນວຕັ້ງໃສ່ເຍື່ອ cellulose acetate (ດ້ານຫຍາບ), ປະມານ 1.5 ຊຕມຈາກຂອບ.
Electrophoresis
ຖອກການແກ້ໄຂ borate buffer ເຂົ້າໄປໃນຫ້ອງ electrophoresis. ວາງເຍື່ອ cellulose acetate ກັບດ້ານທີ່ມີຈຸດໆຢູ່ປາຍ cathode ຂອງຫ້ອງ. ແລ່ນຢູ່ທີ່ 200 V ສໍາລັບ 30 ນາທີ.
Elution
ຕັດເຂດ HbA ແລະ HbA2 ອອກ, ວາງໄວ້ໃນທໍ່ທົດລອງແຍກຕ່າງຫາກ, ແລະຕື່ມ 15 ml ແລະ 3 ml ຂອງນ້ໍາກັ່ນ, ຕາມລໍາດັບ. ສັ່ນຄ່ອຍໆເພື່ອລົບລ້າງ hemoglobin ຢ່າງສົມບູນ, ຫຼັງຈາກນັ້ນປະສົມ.
Colorimetry
ສູນການດູດຊຶມໂດຍໃຊ້ນ້ໍາກັ່ນສໍາລັບການແກ້ໄຂ elution ແລະວັດແທກການດູດຊຶມຢູ່ທີ່ 415 nm.
ການຄິດໄລ່
HbA2(%) = ການດູດຊຶມຂອງທໍ່ HbA2 / (ການດູດຊຶມຂອງທໍ່ HbA × 5 + ການດູດຊຶມຂອງທໍ່ HbA2) × 100%
ການຄິດໄລ່ຜົນການທົດລອງ
ຂອບເຂດອ້າງອີງສຳລັບ pH 8.6 TEB Buffer Cellulose Acetate Electrophoresis: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%
ບັນທຶກ
ເວລາ electrophoresis ບໍ່ຄວນຍາວເກີນໄປ. ເຍື່ອ cellulose acetate ບໍ່ຄວນແຫ້ງໃນລະຫວ່າງການ electrophoresis. ຢຸດ electrophoresis ເມື່ອ HbA ແລະ HbA2 ຖືກແຍກອອກຢ່າງຊັດເຈນ. electrophoresis ເປັນເວລາດົນນານສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການແຜ່ກະຈາຍຂອງແຖບແລະການເຮັດໃຫ້ມົວ.
ຫຼີກເວັ້ນການນໍາໃຊ້ຕົວຢ່າງຫຼາຍເກີນໄປ. ທາດແຫຼວຂອງ hemoglobin ຫຼາຍເກີນໄປສາມາດນໍາໄປສູ່ການແຍກແຖບຫຼືຄວາມບໍ່ພຽງພໍ, ສົ່ງຜົນໃຫ້ລະດັບ HbA ສູງທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ.
ປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນຂອງເຍື່ອ cellulose acetate ດ້ວຍທາດໂປຼຕີນ.
ປະຈຸບັນບໍ່ຄວນສູງເກີນໄປ; ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນ, ແຖບ hemoglobin ອາດຈະບໍ່ແຍກອອກ.
ສະເຫມີປະກອບມີຕົວຢ່າງຈາກບຸກຄົນປົກກະຕິແລະມີຄວາມຈໍາເປັນທີ່ຮູ້ຈັກ hemoglobins ຜິດປົກກະຕິເປັນການຄວບຄຸມ.
ປັກກິ່ງ Liuyi Biotechnology ຜະລິດຖັງ electrophoresis ມືອາຊີບສໍາລັບ hemoglobin electrophoresis ທີ່ເປັນຕົວແບບDYCP-38Ccellulose acetate membrane electrophoresis tank, ແລະມີສອງແບບຂອງການສະຫນອງພະລັງງານ electrophoresis ທີ່ມີຢູ່ສໍາລັບ cellulose acetate membrane electrophoresis tankDYY-2CແລະDYY-6Cການສະຫນອງພະລັງງານ.
ໃນຂະນະດຽວກັນ, ປັກກິ່ງ Liuyi Biotechnology ສະຫນອງເຍື່ອ cellulose acetate ສໍາລັບລູກຄ້າ, ແລະຂະຫນາດຂອງ cellulose acetate membrane ສາມາດປັບແຕ່ງໄດ້. ຍິນດີຕ້ອນຮັບຖາມພວກເຮົາສໍາລັບຕົວຢ່າງແລະຂໍ້ມູນເພີ່ມເຕີມ.
ຍີ່ຫໍ້ປັກກິ່ງ Liuyi ມີປະຫວັດສາດຫຼາຍກວ່າ 50 ປີໃນປະເທດຈີນແລະບໍລິສັດສາມາດສະຫນອງຜະລິດຕະພັນທີ່ຫມັ້ນຄົງແລະມີຄຸນນະພາບສູງທົ່ວໂລກ. ຜ່ານການພັດທະນາຫຼາຍປີ, ມັນສົມຄວນທີ່ທ່ານເລືອກ!
ໃນປັດຈຸບັນພວກເຮົາກໍາລັງຊອກຫາຄູ່ຮ່ວມງານ, ທັງ OEM electrophoresis tank ແລະຜູ້ຈັດຈໍາຫນ່າຍໄດ້ຮັບການຕ້ອນຮັບ.
ຖ້າທ່ານມີແຜນການຊື້ຜະລິດຕະພັນຂອງພວກເຮົາ, ກະລຸນາຢ່າລັງເລທີ່ຈະຕິດຕໍ່ພວກເຮົາ. ທ່ານສາມາດສົ່ງຂໍ້ຄວາມຫາພວກເຮົາທີ່ອີເມວ[ອີເມລປ້ອງກັນ]ຫຼື[ອີເມລປ້ອງກັນ], ຫຼືກະລຸນາໂທຫາພວກເຮົາທີ່ +86 15810650221 ຫຼືເພີ່ມ Whatsapp +86 15810650221, ຫຼື Wechat: 15810650221
ເວລາປະກາດ: ກັນຍາ-20-2023