ເຕັກນິກພື້ນຖານຂອງ Agarose Gel Electrophoresis (1)

1. ການຈັດປະເພດ

gel electrophoresis ແບ່ງອອກເປັນປະເພດແນວຕັ້ງ (ລວມທັງ gels ຖັນແລະ gels ຝາອັດປາກຂຸມ) ແລະປະເພດແນວນອນ (ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນ gels ຝາອັດປາກຂຸມ) (ຮູບ 6-18). ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວ, ການແຍກແນວຕັ້ງແມ່ນດີກວ່າເລັກນ້ອຍກັບແນວນອນ, ແຕ່ການກະກຽມ gel ຕາມແນວນອນມີຢ່າງຫນ້ອຍສີ່ຂໍ້ດີ: ມີການສະຫນັບສະຫນູນພາຍໃຕ້ gel ທັງຫມົດ, ອະນຸຍາດໃຫ້ນໍາໃຊ້ agarose ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່ໍາ; ມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະກະກຽມແຜ່ນ gel agarose ຂອງສະເພາະທີ່ແຕກຕ່າງກັນ; ການກະກຽມ gel ແລະການໂຫຼດຕົວຢ່າງແມ່ນສະດວກກວ່າ; ສະພາການ electrophoresis ແມ່ນງ່າຍທີ່ຈະກໍ່ສ້າງແລະປະຫຍັດຄ່າໃຊ້ຈ່າຍ. ນັບຕັ້ງແຕ່ electrophoresis ຕາມແນວນອນຖືກປະຕິບັດກັບແຜ່ນ agarose gel ທີ່ຈົມຢູ່ໃຕ້ນ້ໍາຢ່າງເຕັມສ່ວນປະມານ 1 ມມພາຍໃຕ້ພື້ນຜິວຂອງ buffer electrophoresis, ມັນຖືກເອີ້ນວ່າ electrophoresis ໃຕ້ນ້ໍາ.

图片2

Electrophoresis Tank DYCP-31DN ສໍາລັບ electrophoresis gel agarose

2.ລະບົບ Buffer

ໃນ​ການ​ແຍກ​ອາ​ຊິດ nucleic​, ລະ​ບົບ​ສ່ວນ​ໃຫຍ່​ຮັບ​ຮອງ​ເອົາ​ລະ​ບົບ​ຕໍ່​ເນື່ອງ​. ບັຟເຟີ electrophoresis ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປລວມມີ TBE (0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L ອາຊິດໂບລິກ, 0.0024mol/L EDTA) buffer ແລະ THE (0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L. sodium acetate, 0.0018mol/L EDTA) buffer. buffers ເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນໄດ້ຖືກກະກຽມໂດຍທົ່ວໄປເປັນ 10x ການແກ້ໄຂຫຼັກຊັບແລະ diluted ກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ກໍານົດໄວ້ໃນເວລາທີ່ການນໍາໃຊ້. ອັດຕາການຍ້າຍຖິ່ນຖານຂອງ DNA ເສັ້ນແລະວົງກົມໃນ gel agarose ແຕກຕ່າງກັນກັບ buffer ທີ່ໃຊ້. ໃນ buffer, ອັດຕາການຍ້າຍຖິ່ນຖານຂອງ DNA ເສັ້ນແມ່ນໃຫຍ່ກວ່າຂອງ DNA ວົງ, ໃນຂະນະທີ່ຢູ່ໃນ TBE buffer, ກົງກັນຂ້າມແມ່ນຄວາມຈິງ.

3

3.Preparation of Agarose Gel

(1) ການກະກຽມ Gel Agarose ຕາມແນວນອນ

(a) ກະກຽມຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ຕ້ອງການຂອງເຈນ agarose ໂດຍໃຊ້ 1x electrophoresis buffer.

(b) ເຮັດຄວາມຮ້ອນໃຫ້ agarose ສໍາເລັດການລະລາຍໃນອາບນ້ໍາຕົ້ມ, ໃນ stirrer ແມ່ເຫຼັກ, ຫຼືໃນ microwave ໄດ້. ເຮັດໃຫ້ການແກ້ໄຂ agarose ເຢັນຢູ່ທີ່ 55 ° C ແລະຕື່ມສີຍ້ອມ ethidium bromide (EB) ໄປສູ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍຂອງ 0.5 μg / ml.

(c) ປະທັບຕາຂອບຂອງແກ້ວຫຼືແຜ່ນ acrylic ດ້ວຍຈໍານວນເລັກນ້ອຍຂອງ agarose gel, ເພີ່ມ comb, ແລະວາງ comb ແຂ້ວປະມານ 0.5 ~ 1.0 ມມຂ້າງເທິງແຜ່ນ.

(d) ຖອກນ້ໍາ agarose gel ຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງເຂົ້າໄປໃນແກ້ວຫຼືແມ່ພິມແຜ່ນ acrylic (ຄວາມຫນາແມ່ນຂຶ້ນກັບປະລິມານຂອງຕົວຢ່າງ DNA), ຫຼີກເວັ້ນການແນະນໍາຂອງຟອງອາກາດ. ໃຫ້ມັນແຂງຕົວຕາມທໍາມະຊາດໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.

(e) ເອົາຫວີອອກຢ່າງລະມັດລະວັງຫຼັງຈາກການແຂງຢ່າງສົມບູນ. ເພີ່ມປະລິມານທີ່ເໝາະສົມຂອງ electrophoresis buffer ໃສ່ຖັງ gel, ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າແຜ່ນ gel ຈົມຢູ່ໃຕ້ພື້ນຜິວຂອງ electrophoresis ປະມານ 1 ມມ.

(2) ການກະກຽມຂອງ Vertical Agarose Gel

(a) ເອົາໄຂມັນຫຼືສິ່ງເສດເຫຼືອອອກຈາກແຜ່ນແກ້ວໂດຍການລ້າງດ້ວຍເອທານອນ.

(b) ວາງແຜ່ນ spacer ລະຫວ່າງເຂື່ອນທາງຫນ້າແລະດ້ານຫລັງ, ວາງຂອບຂອງແຜ່ນ spacer ກັບເຂື່ອນທາງຫນ້າແລະຫລັງ, ແລະຍຶດຫມັ້ນດ້ວຍ clamps.

(c) ເພີ່ມ 2% agarose ໃນ 1x buffer ລະຫວ່າງແຄມຂອງແຜ່ນ spacer ເພື່ອສ້າງເປັນ plug agarose ສູງ 1 cm ຢູ່ດ້ານລຸ່ມຂອງຫ້ອງຫລໍ່ gel.

(d) ເອົາເຈນ agarose ທີ່ລະລາຍໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ຕ້ອງການ, ກະກຽມໃນ 1x buffer, ເຂົ້າໄປໃນຫ້ອງ gel ສູງເຖິງ 1 ຊຕມຂ້າງລຸ່ມນີ້ດ້ານເທິງ.

(e) ເອົາຫວີເຂົ້າ, ຫຼີກເວັ້ນການຕິດຟອງອາກາດພາຍໃຕ້ແຂ້ວຫວີ. ບາງຄັ້ງ, wrinkles ອາດຈະປາກົດຢູ່ໃນແຂ້ວ comb ໃນລະຫວ່າງການເຮັດຄວາມເຢັນ gel agarose; ໃນກໍລະນີດັ່ງກ່າວ, ພຽງແຕ່ເພີ່ມ agarose melted ບາງຢູ່ດ້ານເທິງເພື່ອເຮັດໃຫ້ມັນແຂງ.

(f) ເອົາຫວີອອກ. ເພື່ອປ້ອງກັນການຮົ່ວໄຫຼຂອງ buffer ໃນຊ່ອງໂຫຼດ, ຜະນຶກການເຊື່ອມຕໍ່ລະຫວ່າງແຜ່ນ agarose gel ແລະຫ້ອງ electrophoresis ດ້ວຍ 2% agarose ແລະເພີ່ມຈໍານວນ buffer ທີ່ຕ້ອງການ.

(g) ເພີ່ມ 1x electrophoresis buffer ໃສ່ຫ້ອງ gel.

(h) ລະມັດລະວັງການໂຫຼດຕົວຢ່າງ DNA ເຂົ້າໄປໃນ gel agarose ພາຍໃຕ້ buffer.

3

ຂໍ້ມູນເພີ່ມເຕີມກ່ຽວກັບຄວາມຮູ້ພື້ນຖານກ່ຽວກັບ agarose gel electrophoresis, ພວກເຮົາຈະແບ່ງປັນໃນອາທິດຫນ້າ. ຫວັງວ່າຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ເປັນປະໂຫຍດຕໍ່ການທົດລອງຂອງເຈົ້າ.

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ມີຄວາມຊ່ຽວຊານໃນການຜະລິດເຄື່ອງມື electrophoresis ສໍາລັບຫຼາຍກ່ວາ 50 ປີກັບທີມງານດ້ານວິຊາການມືອາຊີບຂອງພວກເຮົາເອງແລະສູນ R & D. ພວກເຮົາມີສາຍການຜະລິດທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ແລະຄົບຖ້ວນສົມບູນຈາກການອອກແບບເພື່ອກວດກາ, ແລະສາງ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການສະຫນັບສະຫນູນດ້ານການຕະຫຼາດ. ຜະລິດຕະພັນຕົ້ນຕໍຂອງພວກເຮົາແມ່ນ Electrophoresis Cell (ຖັງ / ຫ້ອງ), Electrophoresis Power Supply, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel ຮູບພາບ & ລະບົບການວິເຄາະແລະອື່ນໆ.

ໃນປັດຈຸບັນພວກເຮົາກໍາລັງຊອກຫາຄູ່ຮ່ວມງານ, ທັງ OEM electrophoresis tank ແລະຜູ້ຈັດຈໍາຫນ່າຍໄດ້ຮັບການຕ້ອນຮັບ.

ຖ້າທ່ານມີແຜນການຊື້ຜະລິດຕະພັນຂອງພວກເຮົາ, ກະລຸນາຢ່າລັງເລທີ່ຈະຕິດຕໍ່ພວກເຮົາ. ທ່ານສາມາດສົ່ງຂໍ້ຄວາມຫາພວກເຮົາທີ່ອີເມວ[ອີ​ເມລ​ປ້ອງ​ກັນ​]ຫຼື[ອີ​ເມລ​ປ້ອງ​ກັນ​], ຫຼືກະລຸນາໂທຫາພວກເຮົາທີ່ +86 15810650221 ຫຼືເພີ່ມ Whatsapp +86 15810650221, ຫຼື Wechat: 15810650221.

ກະລຸນາສະແກນລະຫັດ QR ເພື່ອເພີ່ມໃສ່ Whatsapp ຫຼື WeChat.

2


ເວລາປະກາດ: ວັນທີ 07-07-2023